Los títulos de anticuerpos han sido ampliamente usados por los veterinarios para indicar la exposición a determinada enfermedad.  Tradicionalmente, se han usado con frecuencia para evaluar la condición de inmunidad del hato, pero ahora los expertos dicen que usar los valores de los títulos de esa manera puede informar de manera incorrecta a los veterinarios.  "Un título le da el nivel presente de anticuerpos en un muestreo," dice John Ellis, DVM, Ph.D., profesor de Microbiología y Diplomado ACVP y ACVM, en el Colegio Occidental de Medicina Veterinaria, Saskatoon, Saskatchewan, Canadá.  "Sin embargo, no le dice nada sobre la respuesta inmune celular."

Los resultados de titulación varían

Una titulación es una medida de anticuerpos a un epitope o segmento particular de proteína en bacterias o virus.  "Un título de anticuerpos confirma que un animal se ha expuesto a un antígeno mediante una infección natural o por la exposición artificial, tal como una vacunación," explica Clayton Kelling, DVM, Ph.D., veterinario virologista en la Universidad de Nebraska en Lincoln.

"La magnitud del título de anticuerpos refleja la magnitud de la respuesta inmune humoral a la estimulación antigénica."

Ellis agrega que aunque las diferentes pruebas darán las medidas de anticuerpos, la información variará dependiendo del tipo de prueba, tal como una seroneutralización (SN), fijación de complemento, ELISA, prueba de inhibición hemoaglutinación u otras pruebas.

Los dos de los métodos más comunes para medir títulos en el laboratorio son las pruebas de seroneutralización y ELISA.  Kelling dice que los sueros muestreados se prueban diluyendo en serie las muestras y reaccionando las diversas diluciones de suero con una dosis óptima predeterminada del antígeno específico y aplicando los componentes antigeno-suero a un sistema indicador.

El problema con ambas pruebas, SN y ELISA es de que no pueden fácilmente ser comparadas de un laboratorio a otro laboratorio a causa de la variabilidad entre los métodos de prueba, los reactivos que se usan y la subjetividad de las medidas de laboratorio a laboratorio.  Algunas pruebas, tales como las usadas para pseudorabia, se han normalizado, pero la mayoría de las pruebas para enfermedades bovinas no se han normalizado entre laboratorios.

"Hay considerable variación de laboratorio a laboratorio cuando las mismas muestras de suero se prueban, y estas pruebas serán singularmente diferentes entre compañías,"  dice Doug Armstrong, DVM, veterinario de servicios técnicos para la Corporación Bayer, Salud Animal, Canon City, Colo.

Ésto hace que sea importante seleccionar un laboratorio para pruebas serológicas.  "Básicamente usted tiene que encontrar un laboratorio en el que usted se sienta confiado en usar, y haberlo usado por un tiempo para que usted sepa de la consistencia de sus resultados y como los interpretan," agrega Víctor Cortese, DVM, Diplomado ABVP, de Pfizer Salud Animal, Exton, Penn.

Influenciando los títulos

La vacunación o la exposición natural influye en los títulos de anticuerpos.  Unos títulos de cero pueden significar tres cosas, según Cortese:  1) el animal nunca se ha expuesto a la enfermedad o no ha se ha vacunado;  2) la prueba de laboratorio no detecta el título;  o 3) la exposición ocurrida fue con una cepa del patógeno diferente a la cepa de referencia del laboratorio.

"Una título negativo es más significante cuando se compara a otros animales con títulos en la manada," dice Kelling.  "Significa que el animal nunca se ha expuesto al antígeno en el pasado distante o muy reciente.  Su importancia depende de la historia del animal con respecto a la ocurrencia de enfermedad en el hato."

¿Qué significa un título alto? Ellis dice que él asociaría normalmente un título sumamente alto con una infección o exposición reciente, y Cortese agrega que la enfermedad no ocurre necesariamente simplemente a causa de la exposición.  "La vida media de IgG está sobre las tres semanas, así que cada tres semanas perderá la mitad de la cantidad de anticuerpos que tiene," dice Ellis.  "Simplemente escogiendo un punto en el tiempo de un animal y estimando si está dentro de un cierto rango de titulación puede ser engañoso."

Niveles de titulación indicando exposición, infección o la protección adecuada de una vacuna difieren de enfermedad a enfermedad, así que un simple título a un nivel tal como 1:8 no puede ser aplicado a través de diversas enfermedades.  "Algunos animales llevarán naturalmente altos títulos y algunas enfermedades darán usted muy altos títulos en el tiempo de exposición," explica Cortese.  Es también difícil, afirman los expertos, determinar si un título es el resultado de una enfermedad o de una vacunación.

Ellis agrega que si un animal con un alto título a un agente específico, tal como un virus respiratorio, se desafía con ese agente, el título podría no cambiar notablemente.

"Si que el animal se desafía con un virus antígenicamente similar a aquel con el que está infectado, entonces el título puede no variar."  Ellis cita otro ejemplo de cuando usted no podría esperar un cambio en el título anticuerpos a la exposición siguiente es en el caso de animales persistentemente infectados con BVD.

El tiempo

El tiempo es otro factor para considerar cuando se evalúan títulos.  Kelling dice que títulos a virus tales como BVD son altamente dependientes con el tiempo.  El tiempo de respuesta a una vacunación puede depender del tipo de vacuna usada, tales como inactivadas o vivas, o una exposición natural.

"Hay una demora como de 12 días después de la infección antes de desarrollar títulos mensurables, y el título no llegará a su plateau hasta semanas después de que la exposición ha ocurrido,"  comenta Kelling.  Amstrong está de acuerdo y agrega que como los títulos de BVD, los títulos de IBR no son medibles por 10 a 14 días.  Los virus como el BVD puede ser tramposos cuando son evaluados por títulos.  "Cuando usted tiene un aborto casi a término y sospecha de BVD, usted puede ser suficientemente afortunado para ver aumentados en cuatro veces los títulos si es una infección reciente."  Amstrong agrega, "Sin embargo, eso no es comúnmente el caso porque la exposición al virus es algunos meses con anterioridad al aborto, y como resultado usted puede ver títulos que están declinando."

"La edad del animal debe también ser considerada ya que los animales más jóvenes pueden tener títulos por anticuerpos calostrales," dice Kelling.  Él da como ejemplo becerros de carne que tienen inmunidad pasiva a BVD y BRSV hasta que tienen cuatro a cinco meses de edad.

Para la mayoría de las enfermedades, una vez que ocurre un título tenderá a permanecer elevado para un período largo, sin embargo, según Amstrong, BRSV es una excepción en su título con respecto a la enfermedad clínica ya que sube y entonces rápidamente baja.  "Cuando un animal que no ha tenido contacto a BRSV se expone al virus virulento de campo, la respuesta del título se desarrolla y decae rápidamente," explica.

"A fin de encontrar un título de BRSV aumentado por una infección natural, usted necesita obtener muestreos de suero tres a cinco días después, a diferencia de lo qué nosotros hacemos con otras entidades bacteriológicas y virales que se obtienen de 10 a 14 días."  Armstrong dice que si espera una semana o más, usted puede no encontrar el aumento de corta duración de hasta cuatro veces en los títulos como resultado de la enfermedad clínica.

Cortese agrega que para BRSV y otras enfermedades los títulos indican que una exposición ha ocurrido, pero no nos puede indicar cuando ocurrió.  "Los animales enfermos que nosotros probamos frecuentemente han tenido una exposición aguda y cuando nosotros los sangramos, el cambio en el título ya ha ocurrido."  Él agrega que por eso es una buena idea sangrar rutinariamente tanto animales enfermos y como saludables en un corral.

La tensión y la alimentación pobre también influyen el sistema inmune y pueden tener un efecto directo sobre los niveles de los títulos de anticuerpos.  Kelling comenta que en animales malnutridos o estresados se pueden esperar respuestas irregulares a la vacunación o infección natural y puede tener niveles de títulos de anticuerpos significativamente inferiores.

"Usted no quiere vacunar cuando los niveles de estres son altos en los animales," dice EIlis.  "Vacunar a los animales estresados incidirá negativamente en la respuesta que usted consiga.  Un animal inmunodeprimido no puede ser capaz de dar una buena respuesta de anticuerpos después de una exposición."

Los sueros pareados son cruciales.

Muchas de nuestras enfermedades bovinas tales como IBR, BVD y BRSV son endémicas en los hatos y es bastante fácil de determinar la exposición sangrando animales y midiendo títulos.  Sin embargo, evaluando una sola muestra de suero el muestreo puede darle un indicio de un título, aunque no dice mucho mas de cuando un animal se expuso ya sea naturalmente o por la vacunación, o si el título ha cambiado sobre un período de tiempo.

"Las pruebas conducidas sobre muestreos simples para apoyar el diagnóstico clínico o para determinar la condición de infección de un rebaño para diagnosticar una enfermedad, es un ejercicio de futilidad," asegura Kelling.  Esto, él agrega, es por lo qué es importante para usar sueros pareados.

"Para muestreos pareados nosotros necesitamos entre 10 días y dos semanas entre muestreos," Ellis explica.  "Nosotros comúnmente buscamos un aumento de cuatro veces en los títulos para evaluar si ha ocurrido una seroconversion."  Él dice que el primer muestreo puede tomarse en el día de la vacunación o cuando los signos clínicos agudos aparecen ya que toma al sistema inmune entre tres a cuatro días para responder a la vacunación o a una infección de campo.

Armstrong cree que en este caso, el BRSV es una excepción (vea la sección "Tiempo" en otra página)

Cortese sugiere tomar muestreos serológicos pareados al 10 por ciento del hato, usando tanto animales saludables como enfermos, para tener información sobre el grado de exposición del hato.  "También podemos tomar las muestras iniciales y congelarlas para hacer comparaciones de como una enfermedad se mueve a través de la manada," afirma.

 Los títulos no pueden hacerlo por sí solos

Usar solamente la serología para los hatos de sus clientes puede ser un gran error, además de que tomará mucho de su tiempo, "Si usted está evaluando el grado de exposición en el hato, entonces por lo general, sueros pareados es lo adecuado para hacer este diagnóstico," dice John Ellis, DVM, PhD.

"Si lo que se quiere es evaluar la respuesta a una vacuna, es mas complicado porque no sabemos cuál es la mejor medida para muchas enfermedades.  Cuando se llega a eso, no sabemos cuál es el mejor índice de protección, y que eso es lo que estábamos tratando de entender - que clase de panel de pruebas necesitamos para evaluar la respuesta protectora."

Doug Amstrong, DVM, dice que la medición de los títulos es uno de los sistemas de naturaleza práctica que los veterinarios usan.  "Aún en el caso de IBR donde la inmunidad es en realidad mediada por células, las pruebas de seroneutralización al menos indican que el animal ha tenido contacto con el antígeno y ha respondido a el," afirma.  "Existe alguna correlación, aunque lo que se está midiendo podría no tener nada que ver con la respuesta inmune."

La evaluación de los registros también es importante, de acuerdo con Victor Cortese, DVM, ABVP.  "Se deben tener buenos registros que indiquen verdaderos problemas en el hato, y que puedan ayudar para evaluar si su programa de vacunación hizo lo que se quería que hiciera."

Clayton Kelling, DVM, PhD, está de acuerdo, y dice que el primer lugar para comenzar es evaluar el estado de inmunidad del hato basado en las prácticas de manejo, nutrición y medio ambiente, también en la apariencia, rendimiento e historia del hato.

"Yo usaría esas observaciones para basar un juicio sobre que clase de problemas de salud esperar en el hato y consecuentemente que prácticas preventivas instituir," dice Kelling.  "Con mucha frecuencia se sacan muestras de sangre para pruebas serológicas sin sentido para determinar el estado de inmunidad del hato, y esos resultados pueden no tener significado si no se toman en consideración otros factores."

Los títulos contra los estudios de reto para la evaluación de productos.

¿Porque hemos dependido por tanto tiempo en los títulos para darnos una idea de la protección y de la respuesta inmune?  Probablemente porque son muy fáciles de medir.

"Tradicionalmente, los títulos han sido usados por la industria de la salud animal para indicar que las vacunas están estimulando una respuesta inmune,"  explica Víctor Cortese, DVM, ABVP.  "Lo que no hemos visto, sin embargo, es a los anticuerpos específicos que estamos estimulando, si ellos están verdaderamente protegiendo o no y como ellos corresponden a la inmunidad mediada por células.  Un título puede decirme que una vacuna ha producido una respuesta en un animal seronegativo en una situación específica, pero no puede darme una indicación que tan efectivamente se ha estimulado al sistema inmune o si en realidad existe protección."

Clayton Kelling, DVM, PhD, agrega que con frecuencia se asume inapropiadamente acerca de la inmunidad protectora de una vacuna basado solamente en los resultados de pruebas in vitro de respuesta inmunitaria, tales como títulos de anticuerpos.

John Ellis, DVM, PhD, dice que si los veterinarios están evaluando productos basados en experimentos que usan títulos como sus datos de soporte, se deben hacer varios cuestionamientos tales como:

¿Que clase de pruebas se hicieron para medir la respuesta serológica?

¿Cómo fue que se determinaron y reportaron los títulos?

¿Si existe alguna indicación en la literatura de que una respuesta serológica que fue medida está correlacionada con una enfermedad menos severa y con protección efectiva?

¿Cómo podemos evaluar mejor los productos?  Con estudios de reto.  El problema, sin embargo, es que los estudios de reto son demasiado difíciles, toman demasiado tiempo y son caros para que las compañías los hagan.  "Las evaluaciones serológicas son fáciles de obtener y demasiado frecuentemente pueden ser el único medio de diagnóstico disponible,"  dice Kelling.  "La serología se enfatiza porque es rápidamente disponible mientras que otros sistemas frecuentemente no son prácticos, no están disponibles o son demasiado caros para hacerse."

Kelling dice que los experimentos de reto deben de diseñarse para evaluar parámetros significantes de la salud animal.  "Por ejemplo, la evidencia experimental óptima de la eficacia de una vacuna de BVD en un hato vaca/becerro estaría dado por experimentos en los cuales la vacuna haya mostrado proteger al feto contra la exposición de la madre vacunada al reto de cepas virulentas de BVD aisladas en el campo."

Kelling agrega que en una situación de corral de engorda, la vacuna debe mostrar protección contra el desarrollo de los signos clínicos de la enfermedad cuando el ganado vacunado es expuesto a cepas heterógenas de BVD virulento.  Los experimentos deben ser conducidos de manera que resistan rigurosos análisis estadísticos que muestren que fueron bien controlados y que tuvieron un número estadísticamente significativo de animales.